Качество биотехнологических препаратов: анализ экспрессирующей конструкции в клетках, используемых в производстве белковых препаратов, полученных по технологии рДНК (ICH Q5B)

Quality of Biotechnological Products: Analysis of The Expression Construct in Cells Used for Production of R-DNA Derived Protein Products Q5B

I. Введение

Настоящий документ представляет собой руководство по описанию экспрессирующей конструкции для производства рекомбинантных рДНК-белковых препаратов в эукариотических и прокариотических клетках. В настоящем документе описываются категории данных, являющихся ценными при анализе структуры экспрессирующей конструкции, использованной для производства белков с помощью технологии рекомбинантной ДНК. Настоящий документ не предназначен для описания всех аспектов качества лекарственных препаратов, полученных по технологии рекомбинантной ДНК.

Под экспрессирующей конструкцией понимается экспрессирующий вектор, содержащий последовательность, кодирующую рекомбинантный белок. Сегменты экспрессирующей конструкции необходимо изучить с помощью методов анализа нуклеиновых кислот, а также прочих испытаний, проводимых с очищенным рекомбинантным белком, чтобы обеспечить качество и постоянство свойств готового препарата. Анализ экспрессирующей конструкции на уровне нуклеиновой кислоты следует рассматривать как часть оценки качества, принимая во внимание, что такие испытания предназначены лишь для оценки кодирующей последовательности рекомбинантного гена, но ни точности трансляции (translational fidelity), ни других свойств рекомбинантного белка, таких как вторичная структура, третичная структура и пострансляционные модификации.

II. Научное обоснование анализа экспрессирующей конструкции

Цель анализа экспрессирующей конструкции заключается в подтверждении внедрения в клетку-хозяина правильной кодирующей последовательности продукта и ее поддержания в ходе культивирования до конца производства. Генетическая последовательность рекомбинантных белков, продуцируемых живыми клетками, может подвергаться мутациям, которые могут нарушить свойства белка, приводя к потенциально нежелательным последствиям у пациентов. Ни один экспериментальный подход не способен обнаружить все возможные модификации белка. В целях анализа аминокислотной последовательности белка и структурных особенностей экспрессирующегося белка, обусловленных его пострансляционными модификациями, например, протеолитическим процессингом, гликозилированием, фосфорилированием и ацетилированием, можно использовать методы белкового анализа. Результаты анализа нуклеиновых кислот могут оказаться полезными, поскольку методы белкового анализа могут не выявить все изменения структуры белка, возникающие вследствие мутаций в кодирующей рекомбинантный белок последовательности. Относительная важность анализа нуклеиновых кислот и анализа белка от препарата к препарату варьирует.

В целях верификации кодирующей последовательности и физического состояния экспрессирующей конструкции можно провести анализ нуклеиновых кислот. Анализ нуклеиновых кислот проводят для обеспечения правильной аминокислотной последовательности экспрессируемого белка, но он не предназначен для обнаружения вариантных последовательностей в низких концентрациях. Если клетки-продуценты содержат множество внедренных копий экспрессирующей конструкции, не все из которых транскрипционно активны, более целесообразным может оказаться изучение самого продукта транскрипции с помощью анализа мРНК или кДНК, чем анализ геномной ДНК. В качестве альтернативы подходам, которые зависят от выбора (селекции) отдельных ДНК-клонов, могут рассматриваться аналитические подходы к изучению всей (bulk) совокупности нуклеиновых кислот, например, проводимые на объединенных клонах или материале, подвергнутом амплификации с помощью полимеразной цепной реакции. В целях быстрого и чувствительного подтверждения наличия кодирующей последовательности рекомбинантного белка в экспрессирующей конструкции, допускается использовать и иные методы.

В последующих разделах приводится описание данных, которые необходимо представить для характеристики экспрессирующей конструкции в ходе разработки и валидации процесса производства. Необходимо валидировать аналитическую методологию, чтобы подтвердить ее способность обнаруживать наличие последовательности. Минимальные требования к данным по валидации: оценка пределов обнаружения вариантных последовательностей. Для этого необходимо выполнить методики секвенирования нуклеиновых кислот или белков. В целях учета новых технологических достижений и научных данных принципы и рекомендации по анализу, описанные в настоящем документе, необходимо периодически пересматривать.

Полный текст документа доступен после покупки в личном кабинете.
Купить русскую версию
Войти
1700

переведенный документ

  • 62 скачиваний
  • 31.03.2018 последняя редакция

Для покупки напишите нам на sales@pharmadvisor.ru.

Укажите в письме код этого документа (Качество биотехнологических препаратов: анализ экспрессирующей конструкции в клетках, используемых в производстве белковых препаратов, полученных по технологии рДНК (ICH Q5B)) или названия документов, которые вы хотите приобрести.

Библиотека PharmAdvisor даёт вам доступ к действующим нормативно-правовым актам, а также научным и административным руководствам ICH, EC, EMA, FDA. Они хорошо и точно переведены на русский язык, их современная реализация позволяет работать с ними когда вам удобно.

Часто задаваемые вопросы
Где можно посмотреть примеры переводов?

В открытом доступе несколько полноценных документов. Скачайте их по этой ссылке.

Существуют ли скидки для учебных заведений?

Да, мы предоставляем скидки студентам и учебным заведениям. Пожалуйста, напишите нам по электронной почте с запросом.

Какие существуют способы оплаты кроме кредитной карты?

Мы принимаем различные способы оплаты, включая безналичный перевод, PayPal и наличными курьеру.

В каком формате предоставляются руководства?

При заказе вы получаете моментальный и неограниченный доступ к купленным документам в личном кабинете через специальный интерфейс. Обратите внимание, что для покупки целого пакета документов PharmAdvisor необходимо связаться с нами.

Другие вопросы?

Пишите на info@pharmadvisor.ru

Организация
Оригинальное название

Quality of Biotechnological Products: Analysis of The Expression Construct in Cells Used for Production of R-DNA Derived Protein Products Q5B

Скачать оригинал
Тип документа

Руководство

Страниц в документе

6 страниц

Дата первого принятия

30.11.1995

Дата пересмотра

30.11.1995

Для этого документа есть билингва