1. Введение

Достижения молекулярной генетики и химии нуклеиновых кислот сделали возможным идентификацию, подробный анализ, передачу между организмами и экспрессию в контролируемых условиях генов, кодирующих естественные, биологически активные белки, в целях синтеза соответствующего полипептида.

На сегодняшний день с помощью подобной технологии рекомбинантной ДНК (рДНК) можно произвести достаточное количество лекарственных препаратов, которые ранее было сложно получить из естественных источников. Кроме того, возможность синтезировать нуклеиновые кислоты и осуществлять над ними манипуляции позволяет конструировать гены, кодирующие модифицированные продукты, обладающие отличными от их естественных аналогов свойствами, или даже принципиально новые продукты.

Стандартная стратегия разработки препаратов на основе рДНК заключается во внедрении естественно встречающихся или преднамеренно модифицированных естественных последовательностей или новых нуклеотидных последовательностей в вектор, который вносится в подходящий организм хозяина, чтобы обеспечить эффективную экспрессию желаемого продукта гена. Разработаны как прокариотические, так и эукариотические экспрессирующие системы вектор/клетка-хозяин, которые используются в производстве. Факторы, влияющие на экспрессию чужеродных генов, введенных в нового хозяина с использованием подходящего вектора, являются сложными, поэтому важным аспектом разработки препарата является эффективная, контролируемая экспрессия стабильных, клонированных ДНК-последовательностей.

В целях контроля качества этих препаратов необходимо придерживаться гибкого подхода, чтобы по мере накопления опыта производства и применения, а также вследствие разработки новых технологий можно было модифицировать приведенные рекомендации. Реализация этих рекомендаций в отношении отдельного препарата должна отражать предполагаемое клиническое применение.

Настоящее руководство предназначено для содействия сбору и подаче данных в обоснование заявлений о регистрации препаратов на основе полипептидов, полученных по технологии рДНК и предназначенных для медицинского применения, в Европейском союзе. Оно неразрывно связано с Европейскими Директивами и прочими специализированными руководствами.

2. Вопросы, требующие рассмотрения при производстве

На производство препаратов, полученных по методологии рДНК, распространяются рекомендации для предприятий, на которых производятся биологические препараты (например, Директива 91/356/EEC по GMP и Директива 90/219/EEC о закрытом использовании генетически модифицированных организмов), равно как и некоторые общие рекомендации по контролю качества биологических препаратов.

Так, необходимо уделить должное внимание качеству всех реагентов, используемых в производстве, включая компоненты среды культивирования; спецификации на них необходимо включить в документацию, они должны соответствовать всем действующим европейским рекомендациям (например, Руководству по минимизации риска передачи агентов губчатой энцефалопатии животных посредством лекарственных препаратов для медицинского и ветеринарного применения).

Испытания на активность, аномальную токсичность, пирогенность, стерильность и т.д., применяющиеся к препаратам, полученным стандартными методами, равным образом применяются к препаратам, полученным по технологии рДНК. Использовать в производстве агенты, известные своей способностью вызывать сенсибилизацию у некоторых лиц, такие как пенициллин или другие -лактамные антибиотики, не рекомендуется.

Несмотря на важность всестороннего описания свойств готового препарата, необходимо уделить большое внимание «внутрипроизводственному» контролю — концепции, которая показала свою высокую эффективность для контроля качества бактериальных и вирусных вакцин, получаемых стандартными методами.

Некоторые факторы способны негативно сказаться на постоянстве, безопасности и эффективности препаратов рДНК, им необходимо уделить особое внимание (перечислены ниже):

a)      Всем биологическим системам свойственна генетическая изменчивость, обусловленная мутациями и селекцией; внедрение чужеродных генов в новые клетки хозяина может увеличить генетическую нестабильность. Цель молекулярно-генетических исследований — подтвердить то, что была получена правильная последовательность, которая была внедрена в клетку-хозяина, а также, что как структура, так и количество копий внедренной последовательности сохраняется в клетке в ходе культивирования до завершения производства. Подобные исследования служат источником ценных сведений, которые вместе с проведенными испытаниями на уровне белка необходимо учитывать при обеспечении качества и постоянства свойств препарата.

b)      Продукты, экспрессируемые чужеродными хозяевами, могут отличаться от их естественных аналогов структурно, биологически или иммунологически. Подобные изменения могут возникать на посттрансляционном уровне или в ходе производства или очистки и могут приводить к нежелательным клиническим явлениям. В связи с этим их присутствие следует обосновать и подтвердить наличие постоянного контроля над их содержанием.

c)      Выбор технологии производства влияет на свойства, разнообразие и количество потенциальных примесей в готовом препарате, а также определяет, в отношении каких процессов очистки необходимо подтверждать их способность элиминировать примеси. Примерами служат эндотоксины в препаратах, полученных из бактериальных клеток, и посторонние агенты и ДНК в препаратах, получаемых из клеток млекопитающих.

d)      Нежелательная вариация культуры в ходе производства может привести к изменениям, которые будут благоприятствовать экспрессии других генов системы хозяин/вектор или которые нарушат свойства препарата. Подобная вариация может приводить к различному выходу продукта, изменению самого препарата (например, характер и степень гликозилирования) и (или) качественным и количественным различиям в содержании примесей. Вследствие этого обязательны процедуры, обеспечивающие постоянство условий производства, а также готового препарата.

e)      По мере перехода от лабораторной разработки к полномасштабному промышленному производству происходит существенное укрупнение процессов ферментации и (или) очистки, что может привести к значимым последствиям для качества препарата, включая влияние на его конформационную структуру, выход и (или) качественные и количественные различия в примесях. В связи с этим, в целях обеспечения эквивалентности, в ходе каждого производственного цикла необходимы достаточные внутрипроизводственные контроли и испытания по контролю качества.

Несмотря на то что рекомендации, изложенные ниже, следует рассматривать в качестве общеприменимых, отдельные препараты при контроле качества могут вызывать существенные затруднения. Таким образом, производству и контролю качества каждого препарата необходимо уделять особое внимание, полностью учитывая все индивидуальные характеристики.